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　　顯色液SDS-PAGE電泳后，蛋白質(zhì)按照分子量大小分離，轉(zhuǎn)移到固相載體( 例如硝酸纖維素薄膜)后，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶標(biāo)記的二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色以檢測電泳分離的特異性的蛋白。
 

　　顯色液的使用要點(diǎn)：
 

　　1.請根據(jù)一抗來源選擇試劑盒.
 

　　2 westem blotting DAB顯色法操作簡單，但其敏感性與ECL發(fā)光發(fā)有一定的差距，一般只適用于豐度較高的蛋白.
 

　　3.可以根據(jù)顯色結(jié)果來優(yōu)化實驗反應(yīng)時間。如背景過深，可延長膜封閉時間，加長較終漂洗次數(shù)與時間。如果條帶過弱，同遠(yuǎn)長抗體孵育時間。
 

　　4.如果*沒有條帶，請檢查前期蛋白處理及實驗過程，如果確認(rèn)無誤， 反復(fù)兩次依舊無結(jié)果，請換用ECL發(fā)光法顯色。
 

　　5. TBST (0.01M)配制方法:稱取NaCl8.5g，Tris 1.21g，用800ml的雙蒸水溶解，用鹽酸調(diào)PH到76,再
 

　　加入0SmlTween-20，用雙蒸水加至1000ml,混勻即可。(也可按照自己的配制習(xí)慣來配制)
 

　　顯色液的保存：
 

　　-20C避光密閉保存，- 年有效。若經(jīng)常使用，可將封閉試劑，抗體稀釋液和20倍DAB顯色液B存放于2-8C以方便使用。